Методы обнаружения наркотиков.

Для проведения предварительных исследований этанольные вытяжки в количестве 5—20 мкл наносят на хроматографические пластины для высокоэффективной тонкослойной хроматографии размером 10×10 см с Кизельгелем 60 254, производства фирмы «МЕРК» (Германия). Импортные пластины могут быть заменены отечественными, например, «СОРБФИЛ ПТСХ П-А-УФ». Однако, при этом значения Rf могут измениться. Одновременно на пластины в качестве метчиков наносят стандартные растворы 100 мкгмл исследуемых веществ в этаноле. Количество наносимых метчиков определяется экспертом в каждом конкретном случае в зависимости от количества исследуемого образца, обстоятельств дела и проч. В качестве подвижных систем растворителей рекомендуются: 1) хлороформ : ацетон : этанол : аммиак в пропорции 20 : 20 : 3 : 1; 2) толуол : этанол : триэтиламин (диэтиламин) — 9:1:1. После удаления остатков системы растворителей пластины сушат при температуре +40°С, просматривают в УФ-свете при Ая=254 и 366 нм и обрабатывают реактивами, отмечая получаемую окраску и вычисляя значения Rf. Обнаружение исследуемых веществ рекомендуется проводить следующими реактивами: реактив Марки (раствор формальдегида в концентрированной серной кислоте); раствор нингидрина в ацетоне (0,5 г нингидрина в 40 мл ацетона с нагреванием до +70°С в течение 5—8 мин.)- Ацетон может быть заменён на этилацетат или этанол. Однако при этом результаты ухудшаются. При обнаружении на хроматограммах хроматографических зон, совпадающих по значению Rf, поглощению в УФ-свете и характеру окрашивания после обработки предлагаемыми реактивами с хроматографическими зонами стандартных растворов наркотических средств, проводят подтверждающее исследование экстрактов после обработки их трифторуксусным ангидридом методом хромато-масс-спектрометрии в режиме сканирования масс-спектров. Появление на пластинах после обработки приведёнными выше реактивами окрашенных хроматографических зон, не совпадающих по значению Rf с метчиками, также является причиной для проведения исследований методом хромато-масс-спектрометрии.

Для улучшения хроматогра- фических свойств амфетаминов используют их дериватизацию с применением ангидрида трифторуксусной кислоты. Сухой остаток после экстракции из исследуемых объектов обрабатывают 0,1 мл ангидрида трифторуксусной кислоты (ТФА) при +60°С в течение 30 минут в закрытой ёмкости. После охлаждения реактив упаривают досуха в токе очищенного воздуха. Сухой остаток растворяют в 100 мкл этилацетата или хлороформа.

Рекомендуется следующее оборудование фирмы «Хьюлетт Паккард» (США): 1.         Газохроматографическая колонка ULTRA-1 или НР-5 MS с внутренним диаметром 0,25мм и длиной 30м или их аналоги. 2.         Газовый хроматограф серии НР5890или НР6890. 3.         Масс-селективный детектор НР5970или его более новые аналоги, работающие в режиме ионизации электроннымударом при70эВ. Расход газа-носителя и температурные условия подбираются индивидуально в зависимости от применяемой хроматографической системы на основании параметров удерживания исследуемых веществ. Типовые условия проведения исследований: 1          Хроматограф НР5890с колонкой ULTRA-1 внутренним диаметром 0,25мм и длиной 30метров 2          Газ-носитель гелий 3          Скоростьрасхода газа-носителя. 1,2млмин 4          Температура инжектора240°С, интерфейса280°С 5          Температура колонки программируется от 80до 280°Ссо скоростью 20градмин 6          Объем пробы 1 мкл 7          Способ введения без деления потока газа-носителя 8Параметрымасс-спектрометраустанавливаются ежедневно с помощью программы «AUTOTUNE», за исключением тока нити накаливания, которая устанавливается на 200—400вольт выше После проведения исследований масс-спектры, снятые с вершин хроматогра-фических пиков, сравнивают по стандартной методике с масс-спектрами библиотек «NIST98» и «WILEY275K» производства фирмы «Хьюлетт Паккард» (США), а также библиотеки стандартных масс-спектров исследуемых по данной методике веществ, составленной авторами. В разделе 6.8.1. приведены молекулярные и структурные формулы, а также масс-спектры этих веществ. Вещество считается идентифицированным при совпадении его масс-спектра с библиотечным более чем на 90 % и совпадении его времени удерживания со временем удерживания стандарта идентифицируемого вещества Предел обнаружения метода для всех веществ при использовании колонки ULTRA-1 длиной 30 метров и диаметром 0,32 мм, установленной на приборе НР6890 с детектором НР5973, для трифторуксусных производных амфетаминов составил 10-11 г.

Исследование неизменённых амфетаминов и их аналогов методом масс-спектрометрии при использовании ионизации электронным ударом связано с определёнными трудностями, так как почти все они являются близкими структурными аналогами и имеют схожие, трудно различимые между собой масс-спектры. Например, МДМА и БДБ, МБДБ и МДЕА, метамфетамин и фентермин отличаются друг от друга расположением одной метальной группы, а метамфетамин и эфедрин с псевдоэфедрином — наличием или отсутствием одной гидроксильной группы. В масс-спектрах всех этих веществ нет выраженного молекулярного иона, максимальный пик обычно значительно превышает все остальные по интенсивности и находится в малоинформативном диапазоне от 50 до 90 mz.

Проводится методом внешнего стандарта по молекулярным ионам трифторук-сусных производных исследуемых веществ. Для построения калибровочного графика к навеске 30 мг отмытых по приведённой методике волос и ногтей человека, не принимавшего наркотические средства, добавляют метанольные растворы исследуемого вещества из расчета от 0,2 до 25,0 нгмг. Образцы высушивают на воздухе в течение суток и исследуют по приведённой методике. Построение калибровочного графика проводят по методу наименьших квадратов с использованием не менее 6 калибровочных точек. Каждую концентрацию повторяют не менее 5—6 раз. Предел обнаружения методики оценивается как количество вещества в пробе, соответствующее сигналу детектора, превышающему уровень шумов в 3 раза. Процент извлечения вещества из волос и ногтей оценивается путём сравнения результатов количественного определения экстрактов из указанных объектов с добавлением исследуемых веществ и стандартных растворов этих веществ в хлороформе в соответствующей концентрации. Для всех исследованных веществ процент извлечения составляет более 80 %. Разработанная методика при исследовании образцов волос размером 30 мг надёжно выявляет амфетамины в виде их ТФА-производных на уровне 0,5 нгмг.

Получение ацильных производных амфетаминов, например после их обработки ангидридами различных кислот, приводит к значительному увеличению информативности масс-спектрометрии 103, 104, 167, 234, 299, 422. Кроме того, указанные вещества при хроматографическом определении дают более симметричные пики, что позволяет получать более точные результаты при количественном исследовании. Рисунок 28 показывает масс-спектры ТФА-производных МБДБ и МДЕА и соответствующие им схемы фрагментации. На рисунке чётко видны различия масс-спектров этих двух структурных аналогов. Аналогичным образом происходит фрагментация ТФА-производных эфедрина (псевдоэфедрина) и метамфетамина, которые образуют различимые между собой масс-спектры (см. рисунок 29). Анализ этого рисунка показывает, что гидроксильная группа в молекуле эфедрина значительно изменяет схему его фрагментации по сравнению с метамфетамином. У последнего ионы 118 и 91 mz — одни из самых интенсивных в масс-спектре и практически отсутствует молекулярный ион 245 mz. Для эфедрина картина обратная. Специфика фрагментации ТФА-производных амфетаминов позволяет по масс-спектрам проводить оценку их структуры. далее…